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知識分享：BUNSEN本生(sheng)冷凍管的使用(yong)要點及安(an)全建議
的使用要點：
冷凍管是(shi)一種用(yong)于低(di)溫保(bao)存樣品的實(shi)驗管。常(chang)用(yong)規格有0.5ml、1.8ml、5ml、10ml等。冷凍管使(shi)用(yong)不當(dang)會引起冷凍管爆(bao)炸，導(dao)致(zhi)危險物質泄漏，嚴(yan)重時甚至(zhi)會造成人(ren)身(shen)傷害。
冷凍管也叫菌種保存管。微生物實驗(yan)(yan)室(shi)(shi)常用(yong)的細(xi)菌保存(cun)方法有牛奶法、甘油法、斜面法等。復雜程度不(bu)(bu)同(tong)，效果也大(da)不(bu)(bu)相同(tong)。目前國內大(da)部分實驗(yan)(yan)室(shi)(shi)，實驗(yan)(yan)人員自己(ji)制(zhi)作(zuo)細(xi)菌保存(cun)管，不(bu)(bu)僅(jin)增加了工作(zuo)強度，而且由于(yu)各種(zhong)條件的限(xian)制(zhi)，也不(bu)(bu)能總是令人滿(man)意。
1、需要在生物安全柜內操作(zuo)(zuo)，要保證操作(zuo)(zuo)的無菌性，確保菌種不被污染。
2.冷凍管內(nei)的小瓷(ci)珠顏色可能有所不同，并(bing)不意味(wei)著任何產(chan)品都有不同的功能，而是方便用戶對細(xi)菌(jun)進(jin)行編碼和標記。
3.接種前，因(yin)下列情況不(bu)得使用冷凍管(guan)：
A.瓶子(zi)出現漏液的情況。
B.冷凍(dong)管內的凍(dong)存保護液混濁(表示已被污染(ran))。
C.超過有效保(bao)質(zhi)期。
4.小(xiao)瓷(ci)珠一(yi)旦(dan)從冷凍管中(zhong)取(qu)出，不得以任何理由(you)放回冷凍管中(zhong)。
5.丟棄用過或部(bu)分用過的冷凍試管時，應注(zhu)意防止生物危害。
冷(leng)凍管的使用步(bu)驟：
1.從(cong)細(xi)菌(jun)的純(chun)培(pei)養(yang)物中(zhong)挑(tiao)選(xuan)新鮮培(pei)養(yang)物，制備(bei)濁度約為3-4麥克斯韋比的細(xi)菌(jun)懸液，并(bing)接種到(dao)菌(jun)種儲(chu)存(cun)管中(zhong)。
2.擰緊儲存管，來回轉動4-5次，使細菌乳化，不晃動。
3.將(jiang)儲(chu)存管儲(chu)存在-20-70的冰(bing)箱中。
1.使用低溫(wen)(wen)恒溫(wen)(wen)器儲(chu)存樣品(pin)時，嚴(yan)格要求(qiu)低溫(wen)(wen)恒溫(wen)(wen)器應儲(chu)存在液氮(dan)(dan)(dan)的(de)氣(qi)相(xiang)中或冰箱(xiang)中!如果將冷凍管保存在液氮(dan)(dan)(dan)中，液氮(dan)(dan)(dan)會以一定(ding)概(gai)率(lv)滲入冷凍管內(nei)，復蘇時由于(yu)液氮(dan)(dan)(dan)氣(qi)化，管內(nei)外(wai)壓力不平衡(heng)，容易造成(cheng)冷凍管爆(bao)裂，具(ju)有生物危害性。
2.操作冷凍管復蘇，全(quan)(quan)程使用安(an)(an)全(quan)(quan)防(fang)護(hu)(hu)設備。建議穿實(shi)驗服，戴棉手套(tao)，在安(an)(an)全(quan)(quan)的實(shi)驗臺上(shang)操作。如有(you)可能，請佩戴護(hu)(hu)目(mu)鏡或防(fang)護(hu)(hu)面罩。請格外小心(xin)，因(yin)為夏天的室(shi)內溫度會比(bi)冬(dong)天高。
3.冷凍管廠家認(ren)為在冷凍(dong)保存(cun)細胞的(de)儲存(cun)過(guo)程中，冷凍(dong)管(guan)的(de)冷凍(dong)溫度需要(yao)均勻(yun)。凍(dong)結不均勻(yun)會(hui)導致冰塞的(de)產(chan)生，冰塞會(hui)壓制兩側(ce)液體的(de)溫度傳(chuan)遞(di)，進而產(chan)生危(wei)險的(de)高壓，損壞冷凍(dong)管(guan)。
4.冷凍(dong)樣本(ben)量不(bu)應超(chao)過冷凍(dong)儲存管所(suo)需的工作體積。
冷(leng)凍管廠家認為細胞(bao)的冷(leng)凍保存過程;
1.用預熱的(de)(de)(de)PBS沖洗細(xi)胞。棄去PBS后，加入含(han)有EDTA的(de)(de)(de)胰蛋白酶消(xiao)化液消(xiao)化細(xi)胞(消(xiao)化液可以薄薄地覆蓋(gai)細(xi)胞表面，消(xiao)化液的(de)(de)(de)濃度要(yao)根據不同的(de)(de)(de)細(xi)胞系進行調整(zheng))。
2.在(zai)37度的(de)消化細胞3-5分鐘，不要過度消化。
3.一旦細胞(bao)從底部分(fen)離出來，可以用含血清的培(pei)養基停止消化，用吸(xi)管輕(qing)輕(qing)吹氣，細胞(bao)就(jiu)可以重(zhong)新懸浮。
4.冷凍管(guan)廠家認為離心細胞再懸浮以沉淀細胞，棄(qi)去上清(qing)(qing)液，并用含血清(qing)(qing)的培養基再懸浮細胞沉淀。
5.計數細胞(bao)(建議使用紐鮑爾室)。
6.離心(500 g，5分鐘)細胞再(zai)懸浮并丟棄上(shang)清液。用適當體積的含血清培養基懸浮細胞。
7.將細胞重(zhong)懸液與冷凍保(bao)存液(60%培(pei)養基，20%流式細胞儀，20%二甲基亞砜)以(yi)1，333，601的比例混(hun)合，然(ran)后轉移到冷凍管(guan)中。冷凍試(shi)管(guan)中的細胞濃度應(ying)為(wei)15106個細胞/毫升(sheng)。
8.冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)管(guan)廠家認為含有細胞的(de)(de)(de)(de)冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)管(guan)應以1 K/min的(de)(de)(de)(de)冷(leng)(leng)卻速度冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)。上(shang)述(shu)要求可(ke)通(tong)過將(jiang)冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)管(guan)插入裝有異丙醇的(de)(de)(de)(de)冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)箱(xiang)室(shi)中(zhong)，并將(jiang)其放入70的(de)(de)(de)(de)冰箱(xiang)中(zhong)來實(shi)現。如果冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)溶(rong)液(ye)中(zhong)有其他類型的(de)(de)(de)(de)樣品，冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)管(guan)應直接在(zai)20、70或液(ye)氮的(de)(de)(de)(de)氣相中(zhong)冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)。為了(le)保證每(mei)個樣品的(de)(de)(de)(de)冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)效果均(jun)勻，4毫升和(he)5毫升的(de)(de)(de)(de)Cryo.s管(guan)需要在(zai)20冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)過夜，然后轉移到(dao)70或液(ye)氮的(de)(de)(de)(de)氣體層。
9.然后將冷(leng)(leng)凍儲存(cun)管轉移到液(ye)(ye)氮(dan)罐(guan)中。為了避免污染(ran)(如支原體)并考慮(lv)安全預防措(cuo)施的要求，建議將Cryo.s冷(leng)(leng)凍管放置在液(ye)(ye)氮(dan)上方的氣體層中，而不(bu)是(shi)液(ye)(ye)氮(dan)層中。
冷凍管廠家(jia)認為細胞復(fu)蘇過程：
1.從(cong)液氮罐中(zhong)取出冷(leng)凍(dong)管(guan)后，立即放入37的水(shui)浴中(zhong)解凍(dong)，解凍(dong)時間約為1-2分鐘(zhong)。解凍(dong)時，需要不斷搖(yao)動冷(leng)凍(dong)管(guan)，使其(qi)盡快融化。這一步解凍(dong)過程越快越好。
2.冷凍管廠家認為將解凍后的細胞懸液轉移到15 ml離心管中，需(xu)要(yao)立即加(jia)入一定量的含血清培養基進行混合。
3.離心(500 g，5分鐘)細胞再懸浮并丟棄上清液。用適當體積的含血清培養基重新懸浮細胞沉淀，然后將其分裝到一個或多個細胞培養瓶中。
4.請遵循(xun)細胞接種的推薦濃度。
5.在(zai)接下來的12小時內，細胞需要在(zai)靜止(zhi)狀態下培(pei)養。
6.冷凍管廠家認為細胞更換可在(zai)24-48小時后進行。
冷(leng)凍管 本生(sheng)(sheng)一直視質(zhi)量(liang)控制為企(qi)(qi)業(ye)的(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)命，追(zhui)求企(qi)(qi)業(ye)競爭力(li)的(de)(de)(de)不(bu)斷提升。公司在經營中(zhong)始(shi)終秉(bing)承：遵(zun)紀守(shou)法(fa)，嚴于(yu)律己，寬仁(ren)以待，敢于(yu)承擔的(de)(de)(de)企(qi)(qi)業(ye)精神作為標(biao)準，以過(guo)硬的(de)(de)(de)質(zhi)量(liang)和優良的(de)(de)(de)服務來維護和拓展市場，較大(da)限度的(de)(de)(de)滿(man)足(zu)客戶的(de)(de)(de)需求。與客戶的(de)(de)(de)共贏(ying)，是我們(men)的(de)(de)(de)發展目標(biao)。本生(sheng)(sheng)!您信任的(de)(de)(de)合作伙伴。我們(men)愿與您真誠合作，共創美(mei)好的(de)(de)(de)未來。
