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　　牛乳鐵蛋白(LF)酶聯免疫分析試劑盒說明書

　　本試劑盒僅供(gong)研究使用(yong)。

　　檢測范圍： 96T25μg/mL–850μg/mL

　　使用目的：本試劑盒用于測定牛(niu)血清，血漿及相關樣(yang)本中乳鐵蛋白(LF)含(han)量。

　　實驗原理本試劑盒(he)應用(yong)雙抗體(ti)(ti)夾心(xin)法(fa)測定標本中(zhong)(zhong)牛(niu)乳(ru)鐵蛋白(bai)(bai)(LF)水平。用(yong)純化(hua)的(de)(de)牛(niu)乳(ru)鐵蛋白(bai)(bai)(LF)抗體(ti)(ti)包被微(wei)孔板(ban)，制成固相抗體(ti)(ti)，往(wang)包被單抗的(de)(de)微(wei)孔中(zhong)(zhong)依次加入乳(ru)鐵蛋白(bai)(bai)(LF)，再與HRP標記的(de)(de)乳(ru)鐵蛋白(bai)(bai)(LF)抗體(ti)(ti)結(jie)合，形成抗體(ti)(ti)-抗原-酶標抗體(ti)(ti)復合物，經過洗滌后加底(di)物TMB顯色(se)。TMB在HRP酶的(de)(de)催化(hua)下轉化(hua)成藍色(se)，并在酸的(de)(de)作用(yong)下轉化(hua)成最終的(de)(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)(de)深淺(qian)和(he)樣品中(zhong)(zhong)的(de)(de)乳(ru)鐵蛋白(bai)(bai)(LF)呈正相關。用(yong)酶標儀(yi)在450nm波(bo)長下測定吸光度(OD值(zhi))，通過標準(zhun)曲線計(ji)算樣品中(zhong)(zhong)乳(ru)鐵蛋白(bai)(bai)(LF)濃度。

　　試劑盒組成

　　130倍濃縮洗滌液(ye)20ml×1瓶(ping)7終(zhong)止(zhi)液(ye)

　　6ml×1瓶2酶(mei)標試劑(ji)

　　6ml×1瓶8標準品(1600μg/mL)

　　0.5ml×1瓶(ping)3酶(mei)標(biao)包被板(ban)12孔×8條9標(biao)準品稀釋液

　　1.5ml×1瓶4樣品(pin)稀釋(shi)液

　　6ml×1瓶10說明(ming)書1份5顯色劑(ji)A液

　　6ml×1瓶11封(feng)板膜(mo)2張 6顯色劑B液(ye)

　　6ml×1/瓶12密封袋1個

　　標本要求

　　1.標本采集后(hou)盡早進(jin)行提取，提取按相(xiang)關文獻進(jin)行，提取后(hou)應(ying)盡s快進(jin)行實驗。若不能馬上進(jin)行試驗，可將標本放(fang)于-20℃保存，但(dan)應(ying)避免反復(fu)凍融

　　2.不能檢測含NaN3的(de)樣品(pin)，因NaN3抑制(zhi)辣根過氧(yang)化(hua)物酶(mei)的(de)(HRP)活性。

　　操作步驟

　　1.標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)的(de)(de)(de)稀釋：本試劑盒提供原倍(bei)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)一(yi)支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。800μg/mL5號(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)150μl的(de)(de)(de)原倍(bei)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)加入(ru)150μl標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)稀釋液400μg/mL4號(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)150μl的(de)(de)(de)5號(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)加入(ru)150μl標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)稀釋液200μg/mL3號(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)150μl的(de)(de)(de)4號(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)加入(ru)150μl標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)稀釋液100μg/mL2號(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)150μl的(de)(de)(de)3號(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)加入(ru)150μl標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)稀釋液50μg/mL1號(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)150μl的(de)(de)(de)2號(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)加入(ru)150μl標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)稀釋液

　　2.加(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)：分別設空白孔(kong)(空白對照孔(kong)不加(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)及(ji)酶(mei)(mei)標試劑，其余(yu)各步操作相同)、標準(zhun)孔(kong)、待測樣(yang)(yang)品(pin)(pin)孔(kong)。在酶(mei)(mei)標包被板上(shang)標準(zhun)品(pin)(pin)準(zhun)確加(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)50μl，待測樣(yang)(yang)品(pin)(pin)孔(kong)中先加(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)稀釋液40μl，然后再加(jia)(jia)(jia)待測樣(yang)(yang)品(pin)(pin)10μl(樣(yang)(yang)品(pin)(pin)最終稀釋度(du)為(wei)5倍)。加(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)將(jiang)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)加(jia)(jia)(jia)于酶(mei)(mei)標板孔(kong)底部，盡量不觸及(ji)孔(kong)壁，輕(qing)輕(qing)晃動混勻(yun)。

　　3.溫育(yu)：用封板膜封板后置37℃溫育(yu)30分鐘。

　　4.配液：將30倍濃縮洗(xi)滌液用(yong)(yong)蒸餾(liu)水(shui)30倍稀釋后備(bei)用(yong)(yong)

　　5.洗(xi)(xi)滌(di)：小心揭掉封板(ban)膜，棄去(qu)液體，甩(shuai)干(gan)，每孔加滿洗(xi)(xi)滌(di)液，靜置30秒后棄去(qu)，如此重復(fu)5次，拍干(gan)。

　　6.加(jia)酶(mei)：每孔(kong)加(jia)入酶(mei)標試(shi)劑50μl，空(kong)白(bai)孔(kong)除外。

　　7.溫育(yu)：操作同3。

　　8.洗滌：操(cao)作同5。

　　9.顯(xian)色：每孔先(xian)加入顯(xian)色劑(ji)A50μl，再加入顯(xian)色劑(ji)B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯(xian)色10分鐘(zhong).

　　10.終(zhong)(zhong)止：每(mei)孔加(jia)終(zhong)(zhong)止液50μl，終(zhong)(zhong)止反應(此(ci)時藍色立(li)轉黃色)。

　　11.測定(ding)：以空白(bai)孔(kong)調零(ling)，450nm波長(chang)依序測量(liang)各孔(kong)的吸光度(OD值)。 測定(ding)應在加終止液后15分鐘(zhong)以內(nei)進(jin)行。

　　操作程序總結：

　　計算 以(yi)標(biao)(biao)準(zhun)物的(de)(de)濃度(du)為(wei)(wei)橫坐(zuo)標(biao)(biao)，OD值(zhi)為(wei)(wei)縱坐(zuo)標(biao)(biao)，在坐(zuo)標(biao)(biao)紙上繪出(chu)標(biao)(biao)準(zhun)曲線，根據樣(yang)品(pin)的(de)(de)OD值(zhi)由標(biao)(biao)準(zhun)曲線查出(chu)相應的(de)(de)濃度(du);再乘以(yi)稀釋倍數;或用標(biao)(biao)準(zhun)物的(de)(de)濃度(du)與(yu)OD值(zhi)計算出(chu)標(biao)(biao)準(zhun)曲線的(de)(de)直線回歸(gui)方(fang)程(cheng)(cheng)式，將(jiang)樣(yang)品(pin)的(de)(de)OD值(zhi)代入方(fang)程(cheng)(cheng)式，計算出(chu)樣(yang)品(pin)濃度(du)，再乘以(yi)稀釋倍數，即為(wei)(wei)樣(yang)品(pin)的(de)(de)實際濃度(du)。

　　牛乳鐵蛋白(LF)酶聯免疫分析試劑盒說明書 注意事項

　　1.試劑(ji)盒從(cong)冷藏環境中(zhong)取出應(ying)在室溫(wen)平衡(heng)15-30分鐘后方(fang)可使(shi)用，酶標包被板開封(feng)后如未用完，板條應(ying)裝入密封(feng)袋中(zhong)保存。

　　2.濃(nong)洗滌(di)液(ye)可能會有結晶析出(chu)，稀釋時(shi)(shi)可在水浴中加(jia)溫助溶，洗滌(di)時(shi)(shi)不影響結果。

　　3.各步加(jia)樣均(jun)應使用加(jia)樣器，并經常校(xiao)對(dui)其準確性，以避(bi)免試(shi)驗(yan)誤差。一次加(jia)樣時間最好(hao)控(kong)制(zhi)在5分鐘內(nei)，如(ru)標本數(shu)量多，推薦使用排槍加(jia)樣。

　　4.請每次測定的同時做(zuo)標準曲線，最好做(zuo)復孔。如標本(ben)中(zhong)待測物質含量過(guo)高(樣本(ben)OD值大(da)于標準品孔第一孔的OD值)，請先用樣品稀(xi)釋(shi)液稀(xi)釋(shi)一定倍數(n倍)后(hou)再測定，計算時請最后(hou)乘以總稀(xi)釋(shi)倍數(×n×5)。

　　5.封板膜只(zhi)限一(yi)次性使用(yong)，以避免交叉污染。

　　6.底物(wu)請避光保存。

　　7.嚴(yan)格按(an)照說明書的操作進行，試(shi)驗結果(guo)判定必須(xu)以酶標儀(yi)讀數為(wei)準.

　　8.所有樣品(pin)，洗滌液和各(ge)種(zhong)廢(fei)棄物都(dou)應按傳染物處理。

　　9.本試(shi)劑不(bu)同(tong)批號組分不(bu)得混用。

　　保存(cun)條件及有效(xiao)期1.試劑盒保存(cun)：2-8℃。2.

　　有效期：6個月