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人硝基還原酶酶聯免疫分析試劑盒 本生ELISA
本試劑盒僅供(gong)研究使用。
檢(jian)測(ce)范(fan)圍:96T3ng/L-180ng/L
使用(yong)(yong)(yong)目的(de)(de):本(ben)試劑盒用(yong)(yong)(yong)于(yu)測定人血清(qing)、血漿及(ji)相(xiang)關(guan)液體(ti)樣本(ben)中(zhong)(zhong)(zhong)硝(xiao)(xiao)(xiao)基還(huan)(huan)原(yuan)(yuan)酶(mei)含量。實驗原(yuan)(yuan)理本(ben)試劑盒應用(yong)(yong)(yong)雙抗(kang)(kang)體(ti)夾(jia)心法(fa)測定標(biao)本(ben)中(zhong)(zhong)(zhong)人硝(xiao)(xiao)(xiao)基還(huan)(huan)原(yuan)(yuan)酶(mei)水平。用(yong)(yong)(yong)純化的(de)(de)人硝(xiao)(xiao)(xiao)基還(huan)(huan)原(yuan)(yuan)酶(mei)抗(kang)(kang)體(ti)包被微孔(kong)板,制成(cheng)(cheng)固相(xiang)抗(kang)(kang)體(ti),往包被單抗(kang)(kang)的(de)(de)微孔(kong)中(zhong)(zhong)(zhong)依次加入硝(xiao)(xiao)(xiao)基還(huan)(huan)原(yuan)(yuan)酶(mei),再與HRP標(biao)記的(de)(de)硝(xiao)(xiao)(xiao)基還(huan)(huan)原(yuan)(yuan)酶(mei)抗(kang)(kang)體(ti)結(jie)合,形成(cheng)(cheng)抗(kang)(kang)體(ti)-抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)-酶(mei)標(biao)抗(kang)(kang)體(ti)復合物(wu),經過洗滌后加底物(wu)TMB顯色(se)(se)。TMB在(zai)HRP酶(mei)的(de)(de)催化下(xia)轉化成(cheng)(cheng)藍色(se)(se),并在(zai)酸的(de)(de)作用(yong)(yong)(yong)下(xia)轉化成(cheng)(cheng)最(zui)終的(de)(de)黃色(se)(se)。顏色(se)(se)的(de)(de)深淺和樣品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)硝(xiao)(xiao)(xiao)基還(huan)(huan)原(yuan)(yuan)酶(mei)呈正相(xiang)關(guan)。用(yong)(yong)(yong)酶(mei)標(biao)儀在(zai)450nm波(bo)長下(xia)測定吸光度(OD值),通過標(biao)準曲線計(ji)算樣品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)人硝(xiao)(xiao)(xiao)基還(huan)(huan)原(yuan)(yuan)酶(mei)濃(nong)度。
試劑盒組成
130倍(bei)濃縮洗滌液(ye)(ye)20ml×1瓶7終止液(ye)(ye)
6ml×1瓶2酶標試劑
6ml×1瓶8標準品(pin)(1600μg/mL)
0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條(tiao)9標準(zhun)品稀釋(shi)液(ye)
1.5ml×1瓶4樣(yang)品稀釋液
6ml×1瓶10說(shuo)明書1份5顯色劑A液
6ml×1瓶11封板膜2張 6顯色劑B液
6ml×1/瓶12密封(feng)袋1個
標本要求
1.標(biao)(biao)本(ben)采集后盡(jin)早進(jin)行提(ti)取(qu)(qu),提(ti)取(qu)(qu)按相關文(wen)獻進(jin)行,提(ti)取(qu)(qu)后應盡(jin)s快(kuai)進(jin)行實驗。若不能馬(ma)上進(jin)行試驗,可將標(biao)(biao)本(ben)放于-20℃保(bao)存,但應避免反復凍融(rong)
2.不(bu)能檢測含(han)NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)的稀(xi)釋(shi):本試劑盒提供原倍(bei)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)一支(zhi),用戶可按照下列圖表在小試管中(zhong)進行稀(xi)釋(shi)。800μg/mL5號(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)150μl的原倍(bei)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)加入(ru)(ru)150μl標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)稀(xi)釋(shi)液400μg/mL4號(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)150μl的5號(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)加入(ru)(ru)150μl標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)稀(xi)釋(shi)液200μg/mL3號(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)150μl的4號(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)加入(ru)(ru)150μl標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)稀(xi)釋(shi)液100μg/mL2號(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)150μl的3號(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)加入(ru)(ru)150μl標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)稀(xi)釋(shi)液50μg/mL1號(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)150μl的2號(hao)(hao)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)加入(ru)(ru)150μl標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)稀(xi)釋(shi)液
2.加樣(yang)(yang):分(fen)別設空白孔(kong)(kong)(空白對照孔(kong)(kong)不加樣(yang)(yang)品(pin)及(ji)酶(mei)標試劑,其(qi)余(yu)各步(bu)操(cao)作相同)、標準孔(kong)(kong)、待測(ce)樣(yang)(yang)品(pin)孔(kong)(kong)。在酶(mei)標包被板(ban)上標準品(pin)準確加樣(yang)(yang)50μl,待測(ce)樣(yang)(yang)品(pin)孔(kong)(kong)中先加樣(yang)(yang)品(pin)稀釋液40μl,然后(hou)再(zai)加待測(ce)樣(yang)(yang)品(pin)10μl(樣(yang)(yang)品(pin)最終(zhong)稀釋度為(wei)5倍)。加樣(yang)(yang)將樣(yang)(yang)品(pin)加于酶(mei)標板(ban)孔(kong)(kong)底部,盡量不觸及(ji)孔(kong)(kong)壁,輕輕晃(huang)動(dong)混勻。
3.溫育:用(yong)封板(ban)膜封板(ban)后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30倍濃縮洗(xi)滌液用蒸餾(liu)水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小(xiao)心(xin)揭掉封板膜,棄(qi)去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜(jing)置30秒后(hou)棄(qi)去,如此(ci)重(zhong)復5次,拍干。
6.加酶:每孔加入(ru)酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作(zuo)同5。
9.顯(xian)(xian)色(se):每(mei)孔(kong)先加(jia)入顯(xian)(xian)色(se)劑A50μl,再(zai)加(jia)入顯(xian)(xian)色(se)劑B50μl,輕輕震(zhen)蕩混勻,37℃避光(guang)顯(xian)(xian)色(se)10分鐘(zhong).
10.終止:每孔加終止液(ye)50μl,終止反應(此時(shi)藍(lan)色(se)立轉(zhuan)黃色(se))。
11.測(ce)定:以空白孔(kong)調零,450nm波長依序測(ce)量各孔(kong)的吸光度(OD值)。 測(ce)定應(ying)在加終止液后15分鐘以內進行。
操作程序總結:
計算(suan) 以(yi)標(biao)(biao)準(zhun)物的濃度為橫坐標(biao)(biao),OD值(zhi)為縱坐標(biao)(biao),在坐標(biao)(biao)紙(zhi)上繪出(chu)標(biao)(biao)準(zhun)曲線,根據樣(yang)品的OD值(zhi)由標(biao)(biao)準(zhun)曲線查出(chu)相應的濃度;再乘(cheng)以(yi)稀釋(shi)倍數;或用標(biao)(biao)準(zhun)物的濃度與OD值(zhi)計算(suan)出(chu)標(biao)(biao)準(zhun)曲線的直線回歸方(fang)程式,將(jiang)樣(yang)品的OD值(zhi)代入方(fang)程式,計算(suan)出(chu)樣(yang)品濃度,再乘(cheng)以(yi)稀釋(shi)倍數,即為樣(yang)品的實際濃度。
人硝基還原酶酶聯免疫分析試劑盒 本生ELISA 注意事項
1.試劑盒(he)從冷藏環境中取出應在(zai)室溫(wen)平衡15-30分(fen)鐘后(hou)方可使用(yong)(yong),酶(mei)標包被(bei)板開封后(hou)如(ru)未(wei)用(yong)(yong)完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗(xi)滌(di)液可能會有結(jie)晶析出,稀(xi)釋時可在水浴中加溫助溶(rong),洗(xi)滌(di)時不影響結(jie)果。
3.各(ge)步(bu)加(jia)樣均應使用加(jia)樣器(qi),并經常校對其準確性,以避免試驗(yan)誤差(cha)。一次加(jia)樣時間最(zui)好控制在5分鐘內,如(ru)標本數量多,推薦使用排(pai)槍加(jia)樣。
4.請(qing)(qing)每次(ci)測定(ding)(ding)的同時(shi)做(zuo)標準曲(qu)線,最(zui)好做(zuo)復孔(kong)。如標本中待測物質含量過高(gao)(樣(yang)本OD值(zhi)大于(yu)標準品孔(kong)第一孔(kong)的OD值(zhi)),請(qing)(qing)先用樣(yang)品稀釋(shi)(shi)液稀釋(shi)(shi)一定(ding)(ding)倍數(shu)(n倍)后再測定(ding)(ding),計算時(shi)請(qing)(qing)最(zui)后乘以總稀釋(shi)(shi)倍數(shu)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使(shi)用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存(cun)。
7.嚴格按照(zhao)說明書的操作進行,試驗結果判定(ding)必須以酶標儀讀數為準.
8.所有(you)樣品,洗滌(di)液和各(ge)種廢棄物(wu)(wu)都應按傳(chuan)染物(wu)(wu)處理(li)。
9.本試劑不同批號組分不得混(hun)用。
保存條件及(ji)有效(xiao)期1.試劑盒保存:2-8℃。2.
有效期:6個月