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　　輔酶F420(F420)酶聯免疫分析試劑盒 本生

　　本試劑(ji)盒僅供研究(jiu)使用。

　　檢測范(fan)圍：96T1.2ng/L-50ng/L

　　使用(yong)目(mu)的：本試(shi)劑盒用(yong)于(yu)測(ce)定微生(sheng)物樣本中輔(fu)酶F420(F420)含量(liang)。

　　實驗原理

　　本(ben)試劑(ji)盒應(ying)用(yong)雙抗體(ti)夾心法測定標(biao)(biao)本(ben)中輔(fu)酶(mei)(mei)F420(F420)水平。用(yong)純化的(de)(de)輔(fu)酶(mei)(mei)F420(F420)抗體(ti)包被(bei)微孔(kong)板，制成(cheng)固(gu)相抗體(ti)，往包被(bei)單抗的(de)(de)微孔(kong)中依次加入輔(fu)酶(mei)(mei)F420(F420)，再與(yu)HRP標(biao)(biao)記的(de)(de)輔(fu)酶(mei)(mei)F420(F420)抗體(ti)結合，形成(cheng)抗體(ti)-抗原(yuan)-酶(mei)(mei)標(biao)(biao)抗體(ti)復(fu)合物(wu)，經(jing)過洗(xi)滌后(hou)加底物(wu)TMB顯色(se)。TMB在HRP酶(mei)(mei)的(de)(de)催化下(xia)轉化成(cheng)藍色(se)，并(bing)在酸的(de)(de)作用(yong)下(xia)轉化成(cheng)最終的(de)(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)(de)深淺和樣品(pin)中的(de)(de)輔(fu)酶(mei)(mei)F420(F420)呈(cheng)正相關(guan)。用(yong)酶(mei)(mei)標(biao)(biao)儀在450nm波長下(xia)測定吸(xi)光度(OD值(zhi))，通過標(biao)(biao)準曲(qu)線(xian)計算樣品(pin)中輔(fu)酶(mei)(mei)F420(F420)濃度。

　　試劑盒組成

　　130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液

　　6ml×1瓶2酶標(biao)試劑(ji)

　　6ml×1瓶8標(biao)準(zhun)品(pin)(1600μg/mL)

　　0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液

　　1.5ml×1瓶4樣品稀(xi)釋液

　　6ml×1瓶10說(shuo)明書1份5顯色劑A液

　　6ml×1瓶11封(feng)板膜2張 6顯色(se)劑B液

　　6ml×1/瓶12密封袋1個

　　標本要求

　　1.標本采(cai)集后盡早進(jin)(jin)行(xing)(xing)提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按相關文獻(xian)進(jin)(jin)行(xing)(xing)，提(ti)取(qu)后應(ying)盡s快進(jin)(jin)行(xing)(xing)實驗。若不能馬上(shang)進(jin)(jin)行(xing)(xing)試驗，可將標本放于-20℃保(bao)存，但應(ying)避免反復凍融

　　2.不能(neng)檢測含(han)NaN3的樣品，因NaN3抑制(zhi)辣根過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)的(HRP)活(huo)性。

　　操作步驟

　　1.標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)的(de)(de)稀(xi)釋(shi)：本試(shi)劑(ji)盒提供(gong)原倍(bei)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)一支，用戶(hu)可(ke)按照下列(lie)圖表在小(xiao)試(shi)管中進行稀(xi)釋(shi)。800μg/mL5號(hao)(hao)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)150μl的(de)(de)原倍(bei)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)加入150μl標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)稀(xi)釋(shi)液400μg/mL4號(hao)(hao)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)150μl的(de)(de)5號(hao)(hao)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)加入150μl標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)稀(xi)釋(shi)液200μg/mL3號(hao)(hao)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)150μl的(de)(de)4號(hao)(hao)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)加入150μl標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)稀(xi)釋(shi)液100μg/mL2號(hao)(hao)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)150μl的(de)(de)3號(hao)(hao)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)加入150μl標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)稀(xi)釋(shi)液50μg/mL1號(hao)(hao)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)150μl的(de)(de)2號(hao)(hao)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)加入150μl標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)稀(xi)釋(shi)液

　　2.加(jia)(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)：分別(bie)設空(kong)白孔(kong)(空(kong)白對照孔(kong)不加(jia)(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)及(ji)酶標(biao)試劑，其余各(ge)步操作相同(tong))、標(biao)準(zhun)孔(kong)、待測樣(yang)(yang)品(pin)(pin)孔(kong)。在酶標(biao)包被(bei)板上標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)準(zhun)確加(jia)(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)50μl，待測樣(yang)(yang)品(pin)(pin)孔(kong)中先加(jia)(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)稀(xi)釋液40μl，然后(hou)再加(jia)(jia)(jia)(jia)待測樣(yang)(yang)品(pin)(pin)10μl(樣(yang)(yang)品(pin)(pin)最終稀(xi)釋度為5倍(bei))。加(jia)(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)將樣(yang)(yang)品(pin)(pin)加(jia)(jia)(jia)(jia)于酶標(biao)板孔(kong)底部，盡(jin)量不觸及(ji)孔(kong)壁，輕(qing)輕(qing)晃動混勻。

　　3.溫育：用封(feng)板(ban)(ban)膜封(feng)板(ban)(ban)后置37℃溫育30分鐘。

　　4.配液(ye)：將30倍濃縮洗(xi)滌(di)液(ye)用蒸餾(liu)水(shui)30倍稀(xi)釋后備用

　　5.洗(xi)(xi)滌：小心揭掉封板膜，棄(qi)去液體，甩干，每孔加滿洗(xi)(xi)滌液，靜置30秒后棄(qi)去，如此重復5次(ci)，拍干。

　　6.加酶(mei)：每孔加入酶(mei)標試劑50μl，空(kong)白孔除外。

　　7.溫育：操作同3。

　　8.洗滌(di)：操(cao)作同5。

　　9.顯色：每孔(kong)先加(jia)入(ru)顯色劑A50μl，再加(jia)入(ru)顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

　　10.終(zhong)止(zhi)：每(mei)孔加(jia)終(zhong)止(zhi)液50μl，終(zhong)止(zhi)反應(此時藍(lan)色立轉(zhuan)黃色)。

　　11.測(ce)定(ding)：以(yi)空(kong)白孔調零，450nm波(bo)長依序測(ce)量各(ge)孔的(de)吸(xi)光度(OD值)。 測(ce)定(ding)應在(zai)加終止液后15分鐘以(yi)內進(jin)行。

　　操作程序總結：

　　計算(suan)(suan) 以標準物的濃(nong)度為(wei)橫(heng)坐(zuo)(zuo)標，OD值為(wei)縱坐(zuo)(zuo)標，在坐(zuo)(zuo)標紙(zhi)上(shang)繪(hui)出(chu)標準曲(qu)線，根(gen)據樣(yang)(yang)品的OD值由標準曲(qu)線查出(chu)相應(ying)的濃(nong)度;再乘以稀(xi)釋(shi)倍數;或(huo)用標準物的濃(nong)度與OD值計算(suan)(suan)出(chu)標準曲(qu)線的直線回歸方(fang)程式，將樣(yang)(yang)品的OD值代入方(fang)程式，計算(suan)(suan)出(chu)樣(yang)(yang)品濃(nong)度，再乘以稀(xi)釋(shi)倍數，即為(wei)樣(yang)(yang)品的實際濃(nong)度。

　　輔酶F420(F420)酶聯免疫分析試劑盒 本生 注意事項

　　1.試劑(ji)盒從(cong)冷藏環境中取(qu)出應(ying)在室溫平(ping)衡15-30分(fen)鐘后(hou)方(fang)可使用(yong)，酶(mei)標(biao)包被板開封后(hou)如未用(yong)完，板條應(ying)裝入密封袋中保存。

　　2.濃洗滌液(ye)可能會有結晶析出，稀釋(shi)時可在(zai)水(shui)浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

　　3.各(ge)步加樣(yang)均應使用(yong)加樣(yang)器，并經(jing)常校對其準(zhun)確(que)性(xing)，以避免試驗誤差。一(yi)次加樣(yang)時間最好控制在5分鐘(zhong)內，如標本數量多，推薦(jian)使用(yong)排槍(qiang)加樣(yang)。

　　4.請(qing)每次測定(ding)的同時做標準(zhun)曲線，最好做復孔(kong)。如標本中(zhong)待(dai)測物質(zhi)含量過(guo)高(gao)(樣本OD值大于標準(zhun)品孔(kong)第一孔(kong)的OD值)，請(qing)先用樣品稀釋(shi)(shi)液稀釋(shi)(shi)一定(ding)倍(bei)(bei)數(n倍(bei)(bei))后再測定(ding)，計算時請(qing)最后乘(cheng)以(yi)總稀釋(shi)(shi)倍(bei)(bei)數(×n×5)。

　　5.封(feng)板(ban)膜(mo)只限一次性(xing)使(shi)用(yong)，以避免交(jiao)叉污(wu)染。

　　6.底(di)物請避光保存。

　　7.嚴格按照說明書的(de)操作進行，試驗結果判定必須(xu)以酶標儀讀(du)數為準.

　　8.所(suo)有樣品，洗(xi)滌液和各(ge)種(zhong)廢棄(qi)物都應按傳染物處理。

　　9.本試(shi)劑不(bu)同批號(hao)組分不(bu)得(de)混(hun)用(yong)。

　　保存條件及有效期1.試劑盒保存：2-8℃。2.

　　有效期：6個月